Aktivitas Enzim Pendegradasi Kitin dari Isolat SDI23 Asal Petis serta Karakterisasi pH dan Suhu Aktivitas Enzim Hasil Purifikasi Parsial

Abstract

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas enzim pendegradasi kitin yang dihasilkan selama pertumbuhan dari lima isolat bakteri kitinolitik (SDI23, MDR23, SDI15, SDI13 dan BLT12) asal petis udang serta mengetahui karakteristik aktivitas enzim hasil pemurnian parsial pada berbagai suhu (30-55°C) dan pH (4-9). Kelima isolat ditumbuhkan pada medium koloidal kitin cair dengan suhu inkubasi 37°C selama 96 jam. Pengamatan terhadap jumlah bakteri (log CFU/ml) dan aktivitas spesifik enzim (U/mg) dilakukan setiap 12 jam. Aktivitas enzim pendegradasi kitin diukur secara kuantitatif, dengan mengukur jumlah N-asetilglukosamin yang dihasilkan dari hidrolisis koloidal kitin oleh enzim. Purifikasi parsial dilakukan dengan presipitasi ammonium sulfat bertingkat (20-80%) yang dilanjutkan dengan dialisis. Isolat SDI23, MDR23, SDI15 dan BLT12 menunjukkan waktu pertumbuhan optimum dengan jumlah sel tertinggi pada jam ke-48, sedangkan isolat SDI13 pada jam ke-24. Aktivitas spesifik enzim tertinggi ditunjukkan oleh isolat SDI23 sebesar 0,66 U/mg pada inkubasi selama 48 jam. Berdasarkan
hasil tersebut, isolat SDI23 dipilih untuk memproduksi enzim pada tahap purifikasi parsial. Supernatan bebas sel dari media kultur isolat SDI23 disiapkan dari inkubasi SDI23 dalam medium koloidal kitin cair pada suhu 37oC selama 48 jam. Presipitasi dengan amonium sulfat pada fraksi 80% dan dialisis menghasilkan ekstrak kitinase kasar dengan nilai aktivitas spesifik enzim sebesar 0,072 U/mg dan 0,063 U/mg. Enzim hasil pemurnian parsial menunjukkan aktivitas optimum pada pH 6 dan suhu 45°C dengan nilai aktivitas spesifik enzim sebesar 0,09 U/mg.